матеріал 4

Урок 23. Основи мікроскопії. Світлова мікроскопія

Матеріал

Урок 23. Основи мікроскопії. Світлова мікроскопія


Очікувані результати навчання
  • Аналізує будову та принципи роботи світлового мікроскопа – [12 ПРО 1.4.1]
  • Використовує наукові методи для дослідження мікроскопічних об’єктів – [12 ПРО 1.4.2]
  • Оцінює переваги та обмеження різних методів мікроскопії – [12 ПРО 1.5.2]
  • Розраховує збільшення мікроскопа та оцінює розміри об’єктів під мікроскопом – [12 ПРО 2.2.2]
  • Пояснює значення мікроскопії для розвитку біологічних наук – [12 ПРО 3.4.1]
  • Робить висновки щодо значення мікроскопії у медицині, біотехнологіях та інших галузях науки – [12 ПРО 3.4.2]

Місце уроку в темі:  Цей урок є третім у розділі «Біологія клітини» і присвячений вивченню основ мікроскопії як ключового методу дослідження клітинної будови та функцій клітин. Зосереджений на базовому знайомстві з будовою та застосуванням світлового мікроскопа.

Проблема уроку: Як завдяки мікроскопам стало можливо відкрити «мікровсесвіт» невідомий до цього?

Очікувані результати для вчителя:
  • Учні засвоїли принципи роботи та техніку безпеки при використанні світлового мікроскопа.
  • Учні оволоділи навичками роботи зі світловим мікроскопом.
  • Учні можуть критично оцінювати застосування різних методів світлової мікроскопії у біологічних дослідженнях.
Очікувані результати для учнівства:
  • Я розумію принципи роботи світлового мікроскопа та межі його застосування.
  • Я вмію користуватися світловим мікроскопом для подальшого спостереження клітинних структур.
  • Я усвідомлюю різницю у розмірах різних біологічних об’єктів та можу оперувати одиницями вимірювання при розрахунках.
Ключові слова:
  • мікроскопія
  • світловий мікроскоп
  • роздільна здатність
  • контрастність збільшення
План уроку
  1. Мотивація – відкриття «мікровсесвіту» (5 хв) 
  2. Тобі може знадобитися – характеристики світлового мікроскопа (10 хв) 
  3. Життєва ситуація  – знайомство з будовою мікроскопа, розмірами біологічних об’єктів та масштабами збільшення (15 хв) 
  4. Попрактикуймо самостійно – практичні завдання перед лабораторною роботою (10 хв) 
  5. Рефлексія (5 хв)

1. Мотивація
Дружня порада для вчителя

Тривалість: 5 хв.

🛠 Як провести:

  • Почніть урок із запитання: «Якби ви могли побачити невидимий світ, що б ви захотіли дослідити?»
  • Покажіть історичні зображення перших світлових мікроскопів.

Обговоріть:

  • Чому мікроскоп є основним інструментом біолога?
  • Як технологічний прогрес покращив сучасні мікроскопи?
  • Які виклики можуть стояти перед дослідниками, що працюють із мікроскопами сьогодні?

Головна ідея:
Мікроскоп – це ключ до розуміння «клітинного світу», а правильне його використання – фундаментальна навичка майбутніх біологів.

🔬 Мікроскоп – вікно у невидимий світ!

  • Ви вчений/вчена XVII століття, якому/якій дають загадковий прилад. Ви дивитеся крізь нього і раптом бачите новий світ. Світ, що до цього був прихований від людського ока. Якби у вас не було мікроскопа, ви б ніколи не дізналися, що вода, якою ви втамовуєте спрагу, може бути населена зовсім дрібними організмами, а ваша власна шкіра – складатися з множини клітин.
  • Розгляньте Рис. 1. На ньому зображений один з перших оптичних (світлових) мікроскопів, який у 1674 році створив Антоні ван Левенгук. Не схожий на сучасні, правда?

Мікроскоп Левенгука доволі простий: це звичайна пластинка з лінзою в центрі. Спостерігач має дивитися крізь лінзу на закріплений з іншого боку зразок, крізь який проходило яскраве світло від вікна або свічки (електричних лампочок, вмонтованих у мікроскоп, що працюють на батарейках чи акумуляторах тоді не було). 

Незважаючи на простоту, конструкція дозволяла отримати збільшення, яке у декілька разів перевищувало кратність мікроскопів, що вже існували на той час.

Це дозволило: 

  • Вперше побачити еритроцити, бактерії (1683), дріжджі, найпростіших, сперматозоони (1677). 
  • Дослідити будову очей комах і м’язових волокон, різні форми інфузорій. 
  • Левенгук відшліфував понад п’ятисот лінз і виготовив принаймні 25 мікроскопів різних типів, з яких до нашого часу збереглись тільки дев’ять. 
  • Мікроскопи, що збереглись до наших днів, здатні збільшувати зображення в 275 разів, однак існують неперевірені свідчення про те, що деякі з мікроскопів Левенгука мали 500-кратну силу збільшення.
Рис 1. Мікроскоп Антоні ван Левенгука. Один з перших оптичних мікроскопів, що дозволяв спостерігати у досліджуваних зразках одноклітинні організми. Джерело: Вікіпедія

Подумайте:

  • Як перший світловий мікроскоп змінив погляд науки на життя?
  • Чому точність і правильне налаштування мікроскопа настільки важливі для досліджень?
  • Які деталі навколо нас залишаються невидимими без мікроскопа?

За ці 350-400 років з часу появи перших збільшувальних приладів, завдяки вченим, засоби та методи мікроскопії зробили гігантські кроки вперед.

На Рис. 2 ви можете побачити зображення атомного моношару алкану складу C46H94 (IUPAC: н-Гексатетраконтан), яке виконано завдяки сканувальній тунельній мікроскопії, що дозволяє досліджувати поверхні з атомною точністю. З курсу хімії вам може бути відомо, що алкани є вуглеводнями – органічними хімічними речовинами, що складаються з атомів карбону і гідрогену. Гексатетраконтан є алканом, що за нормальних умов перебуває у твердому агрегатному стані та може зустрічатись у складі парафіну.

Рис 2. Зображення отримане за допомогою сканувального тунельного мікроскопа. На зображенні моношар нормального алкану C46H94. Джерело: Вікіпедія

2. Тобі може знадобитися
Дружня порада для вчителя

Тривалість: 10 хв.

🛠 Як провести:

  • Підготуйте демонстраційну модель мікроскопа.
  • Використайте зображення мікроскопа та реальні фото клітин зі світлової мікроскопії.

Обговорення в класі:

  • Запитайте: «Які організми можна досліджувати за допомогою світлового мікроскопа?»
  • Проведіть інтерактивний розрахунок загального збільшення: нехай учні оберуть окуляр і об’єктив, а потім підрахують загальне збільшення.

📢 Питання для обговорення:

  • Чому світловий мікроскоп не може показати детальну будову клітинних органел?
  • Які обмеження має світловий мікроскоп порівняно з електронним?
  • Як контрастність впливає на якість зображення під мікроскопом?

🔬Які завдання може вирішити світловий мікроскоп?

  • Світловий мікроскоп – це прилад, що використовує світлові промені для збільшення зображення малих об’єктів. Це перший інструмент, який дозволив людству заглянути у світ клітин і став основою для сучасної біології.
Рис 3. Сучасний світловий мікроскоп з бінокулярним окуляром фірми Nikon. Джерело: Вікіпедія

📜 Основні характеристики світлового мікроскопа:

  • Збільшення – у скільки разів зображення об’єкта стає більшим порівняно з реальним розміром. Світловий мікроскоп має обмеження до збільшення. Окулярні лінзи зазвичай дають збільшення від 5х до 15х разів, а сухі об’єктиви до яких світло потрапляє крізь середовище повітря збільшують об’єкти від 8х до 40х разів.

🔢 Як розрахувати загальне збільшення мікроскопа?

Загальне збільшення = збільшення лінз окуляра × збільшення об’єктива

Приклад: якщо окуляр має збільшення 10x, а об’єктив – 40x, то загальне збільшення = 10 × 40 = 400x.

  • Але найбільший результат дає олієзанурна (імерсивна) світлова мікроскопія, коли об’єктив (сильні імерсивні об’єктиви дають збільшення до 90х разів) при наближенні до предметного чи покривного скла занурюється у краплю гліцеролу, кедрової олії чи інших жирів. Такий спосіб спостереження має граничні обмеження збільшення до 3000 разів. 
  • Використання об’єктивів з лінзами, що мають бути для спостереження за об’єктом занурені в олію обумовлене тим, що при проходженні через повітря, промені світла не потрапляють в об’єктив, та інформація про них втрачається – Рис. 4.

Рис 4. Принцип олієзанурної мікроскопії: промені світла (чорні лінії) при проходженні через середовище олії (крізь жовтий колір) потрапляє у об’єктив, у той час як промені, що проходять через повітря (крізь білий колір) заломлюються таким чином, що проходять повз лінзу об’єктива. Джерело: Вікіпедія

  • Роздільна здатність – найменша відстань між двома точками, за якої вони залишаються роздільними (для світлового мікроскопа це обмеження складає близько 200 нм). Приклад цієї ​​концепції представлений на Рис. 5 нижче, де точкові джерела світла від зразка виглядають як дифракційні кільця Ейрі в площині проміжного зображення мікроскопа.
Рис 5. Патерни Ейрі та межа роздільної здатності. Джерело: IMG.UA
  • Контрастність – здатність мікроскопа відображати відмінності між структурами. Для збільшення контрастності досліджуваних об’єктів науковці використовують фазово-контрастну мікроскопію (ФКМ). 
  • Цей метод оптичної мікроскопії винайшов Фріц Церніке, за що отримав Нобелівську премію 1953 року. Метод дозволяє спостерігати за живими клітинами (зокрема їх поділом), оскільки фарбування часто передбачає смерть клітин.
  • Фазові зсуви світла, яких досягають відокремленням прямого та розсіяного світла у методі видно на зображенні як зміни яскравості деталей об’єкта (Рис. 6).
Рис 6. Вигляд тваринної клітини при спостереженні у звичайний світловий мікроскоп (зліва) та фазово-контрастний мікроскоп (зправа). Джерело: Вікіпедія

3. Життєва ситуація
Дружня порада для вчителя

Тривалість: 15 хв.

Демонстрація:

  • Дайте учням реальний мікроскоп, вкажіть на його основні частини та поясніть їх функції.​
  • Запропонуйте учням самостійно розрахувати загальне збільшення для різних комбінацій окулярів та об’єктивів.​

Обговорення:

  • Розгляньте можливі труднощі, з якими можуть зіткнутися учні під час роботи з мікроскопом, способи їх подолання, та основні моменти з техніки безпеки.​

Питання для обговорення:

  • Чому важливо правильно налаштовувати мікроскоп перед початком роботи?​
  • Як якість підготовки зразка впливає на результати спостережень?​
  • Мотивуйте учнів: «Пам’ятайте, що вміння працювати з мікроскопом відкриває двері до невидимого світу, розуміння якого є ключем до багатьох наукових відкриттів».

🔬  Ви – молоді дослідники, які готуються до своєї першої наукової експедиції. Перед вами стоїть завдання: дослідити невідомий мікроорганізм, який потенційно може стати ключем до лікування серйозного захворювання. Але для цього необхідно вміти користуватися основним інструментом біолога – світловим мікроскопом.

Світловий мікроскоп має основні компоненти:

  • Окуляр – розташований у верхній частині, через нього ми дивимось у мікроскоп (його лінзи діють збільшення 5x, 10x, 12х, 15x).
  • Об’єктиви (зазвичай на револьверній голівці, яка обертається) – забезпечують основне збільшення (сухі – 4x, 20x, 40x, імерсивні – 80x).
  • Предметний столик – платформа, де розміщують досліджуваний зразок.
  • Штатив та основа – складові корпусу мікроскопа.
  • Джерело світла – підсвічує препарат.
  • Макрогвинт – забезпечує грубе фокусування на об’єкті при відносно невеликих збільшеннях.
  • Мікрогвинт – забезпечує точне фокусування на об’єкті при більших збільшеннях.
  • Конденсор з діафрагмою – фокусує світло на зразку.

Завдання:

Розгляньте Рис. 7 – підпишіть складові частини світлового мікроскопа.

Рис 7. Світловий мікроскоп. Джерело: Bioninja

Важливі моменти техніки безпеки:

  • Піднімаючи та переставляючи мікроскоп, тримайте його однією рукою за штатив, а іншу покладіть під основу
  • Завжди починайте фокусування на препараті з об’єктива який дає найменше збільшення, а потім не міняючи положення гвинтів переключіться на інший (сильніший) та точно сфокусуйте зображення мікрогвинтом.
  • Обов’язково прибирайте предметне і покривне скло з препаратами з предметного столика після використання (не залишайте предметне скло на місці).
  • Над джерелом світла часто є регульована діафрагма – змінюйте інтенсивність світла, якщо об’єкт не видно.
  • Завжди використовуйте мікроскопи на плоских поверхнях і не залишайте їх надто близько до краю парти/столу.

Розрахунок збільшення за фактичним розміром зображення:

Щоб обчислити збільшення малюнка або зображення, необхідно використовувати рівняння (Рис.8), де

M (збільшення) = I (розмір на зображенні з лінійкою) ÷ А (фактичний розмір відповідно до шкали)

Візьміть лінійку, прикладіть до зображення , а потім до шкали на рисунку та спробуйте визначити реальний розмір представника дрібних багатоклітинних тварин – тихохода (тардиграда), зображеного на Рис. 8. З розрахунків видно що його розміри на

Рис 8. Приклад розрахунку збільшення та реальних розмірів об’єктів на прикладі тихохода. Джерело: Bioninja

Реальний розмір тихохода на зображенні: _______ мкм

Важливо:
Щоб обчислити збільшення, розмір зображення та фактичний розмір мають бути в однакових одиницях. 

Перетворення показників можна застосувати відповідно до наведеної нижче таблиці:

Цікаво знати: Уявіть метрову лінійку. Візуально розділіть її на мільярд рівних частин. Це буде 1 нанометр (10-9 метра) = 1 / 1 000 000 000 частина метра!

Рис 9. Порівняння розмірів біологічних об’єктів, де кожен наступний менше попереднього приблизно у 10 разів. Джерело: Compadre

Розгляньте біологічні об’єкти на Рис. 9. У скільки разів:

  1. Інфузорія більша за бактеріофаг Т2? Відповідь: ____________
  2. Лейкоцит людини за кишкову паличку? Відповідь: ____________

Скільки мікрометрів (мікрон) складає довжина блохи?

Відповідь: ____________ мкм


4. Попрактикуймо самостійно
Дружня порада для вчителя

Тривалість: 10 хв.

Завдання 1: Мікроскопія еритроцитів

На рис. 10 зображені схема еритроцитів черепахи та схема еритроцитів людини. Розгляньте зображення:

Рис 10. Еритроцити черепахи та людини. Джерело: PhAndMathTutor

Еритроцити є клітинами крові тварин. Чого немає у клітинах тварин:

А) цитоплазми
Б) клітинної мембрани
В) клітинної стінки
Г) мітохондрій

Справжня довжина еритроцитів черепахи становить 20.5 мкм.
Обчисліть довжину збільшеного зображення еритроцитів черепахи яке ви побачите у мікроскопі при збільшені 400х:

Відповідь: __________ мкм


Ширина еритроцитів людини при збільшенні в 400 разів становить 3.08 мм. Обчисліть фактичну ширину еритроцита людини та покажіть свою відповідь у стандартній формі:

Відповідь: __________ мм


Для порівняння: клітина листка рослини має довжину 0.04 мм.
Обчисліть довжину зображення після того, як цю клітину було збільшено за допомогою мікроскопа в 500 разів:

Відповідь: __________ мм

Очікувані відповіді учнівства:

Завдання 2: Підготовка до приготування мікропрепарату

На наступному уроці ви будете вивчати методи виготовлення мікропрепаратів, після чого виконаєте лабораторну роботу і будете досліджувати клітини за допомогою мікроскопа.

На Рис. 11 показано обладнання, яке використовується для приготування препарату клітин цибулі.

Рис 11. Обладнання для приготування мікропрепарату. Джерело: PhAndMathTutor

Детально опишіть як кожен компонент, зображений на рис 11 допоможе вам приготувати препарат:

1. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Очікувані відповіді учнівства:


Рефлексія
Дружня порада для вчителя

Тривалість: 5 хв.

Як провести:

  • Формат «мікрофону» – кілька учнів діляться своїми думками перед класом.
  • Робота в парах – учні коротко обговорюють свої враження та відповіді з напарником.
  • Письмовий формат – учні записують відповіді у зошиті.

📢 Питання для стимулювання дискусії:

  • Чому правильне налаштування мікроскопа має значення?
  • Які структури не помітити без електронного мікроскопа?

✍️ Закінчіть речення:

• Найцікавішим відкриттям для мене було:

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
  • Я не очікував/очікувала, що мікроскопія може
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
  • Питання, яке мені ще хотілося б дослідити
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Оцініть свій рівень розуміння:

👍 – Все зрозуміло, можу пояснити іншому.
🤔 – Дещо зрозумів(ла), але залишились питання.
👎 – Мені було складно, хочу розібратись глибше.

💬 Обговорення:

  • Який компонент світлового мікроскопа є найважливішим, на вашу думку, і чому?
  • Як ви вважаєте, які відкриття завдяки мікроскопії можуть чекати на нас у майбутньому?
  • Чи можна було б здійснити великі біологічні відкриття без мікроскопії?

У вільний від відпочинку час

📺 Відео для натхнення:

Інтерактивні моделі:

Урок 23. Основи мікроскопії. Світлова мікроскопія


Очікувані результати навчання

Місце уроку в темі:  Цей урок є третім у розділі «Біологія клітини» і присвячений вивченню основ мікроскопії як ключового методу дослідження клітинної будови та функцій клітин. Зосереджений на базовому знайомстві з будовою та застосуванням світлового мікроскопа.

Проблема уроку: Як завдяки мікроскопам стало можливо відкрити «мікровсесвіт» невідомий до цього?

Очікувані результати для учнівства:
  • Я розумію принципи роботи світлового мікроскопа та межі його застосування.
  • Я вмію користуватися світловим мікроскопом для подальшого спостереження клітинних структур.
  • Я усвідомлюю різницю у розмірах різних біологічних об’єктів та можу оперувати одиницями вимірювання при розрахунках.
Ключові слова:
  • мікроскопія
  • світловий мікроскоп
  • роздільна здатність
  • контрастність збільшення
План уроку
  1. Мотивація – відкриття «мікровсесвіту» (5 хв) 
  2. Тобі може знадобитися – характеристики світлового мікроскопа (10 хв) 
  3. Життєва ситуація  – знайомство з будовою мікроскопа, розмірами біологічних об’єктів та масштабами збільшення (15 хв) 
  4. Попрактикуймо самостійно – практичні завдання перед лабораторною роботою (10 хв) 
  5. Рефлексія (5 хв)

1. Мотивація

🔬 Мікроскоп – вікно у невидимий світ!

  • Ви вчений/вчена XVII століття, якому/якій дають загадковий прилад. Ви дивитеся крізь нього і раптом бачите новий світ. Світ, що до цього був прихований від людського ока. Якби у вас не було мікроскопа, ви б ніколи не дізналися, що вода, якою ви втамовуєте спрагу, може бути населена зовсім дрібними організмами, а ваша власна шкіра – складатися з множини клітин.
  • Розгляньте Рис. 1. На ньому зображений один з перших оптичних (світлових) мікроскопів, який у 1674 році створив Антоні ван Левенгук. Не схожий на сучасні, правда?

Мікроскоп Левенгука доволі простий: це звичайна пластинка з лінзою в центрі. Спостерігач має дивитися крізь лінзу на закріплений з іншого боку зразок, крізь який проходило яскраве світло від вікна або свічки (електричних лампочок, вмонтованих у мікроскоп, що працюють на батарейках чи акумуляторах тоді не було). 

Незважаючи на простоту, конструкція дозволяла отримати збільшення, яке у декілька разів перевищувало кратність мікроскопів, що вже існували на той час.

Це дозволило: 

  • Вперше побачити еритроцити, бактерії (1683), дріжджі, найпростіших, сперматозоони (1677). 
  • Дослідити будову очей комах і м’язових волокон, різні форми інфузорій. 
  • Левенгук відшліфував понад п’ятисот лінз і виготовив принаймні 25 мікроскопів різних типів, з яких до нашого часу збереглись тільки дев’ять. 
  • Мікроскопи, що збереглись до наших днів, здатні збільшувати зображення в 275 разів, однак існують неперевірені свідчення про те, що деякі з мікроскопів Левенгука мали 500-кратну силу збільшення.
Рис 1. Мікроскоп Антоні ван Левенгука. Один з перших оптичних мікроскопів, що дозволяв спостерігати у досліджуваних зразках одноклітинні організми. Джерело: Вікіпедія

Подумайте:

  • Як перший світловий мікроскоп змінив погляд науки на життя?
  • Чому точність і правильне налаштування мікроскопа настільки важливі для досліджень?
  • Які деталі навколо нас залишаються невидимими без мікроскопа?

За ці 350-400 років з часу появи перших збільшувальних приладів, завдяки вченим, засоби та методи мікроскопії зробили гігантські кроки вперед.

На Рис. 2 ви можете побачити зображення атомного моношару алкану складу C46H94 (IUPAC: н-Гексатетраконтан), яке виконано завдяки сканувальній тунельній мікроскопії, що дозволяє досліджувати поверхні з атомною точністю. З курсу хімії вам може бути відомо, що алкани є вуглеводнями – органічними хімічними речовинами, що складаються з атомів карбону і гідрогену. Гексатетраконтан є алканом, що за нормальних умов перебуває у твердому агрегатному стані та може зустрічатись у складі парафіну.

Рис 2. Зображення отримане за допомогою сканувального тунельного мікроскопа. На зображенні моношар нормального алкану C46H94. Джерело: Вікіпедія

2. Тобі може знадобитися

🔬Які завдання може вирішити світловий мікроскоп?

  • Світловий мікроскоп – це прилад, що використовує світлові промені для збільшення зображення малих об’єктів. Це перший інструмент, який дозволив людству заглянути у світ клітин і став основою для сучасної біології.
Рис 3. Сучасний світловий мікроскоп з бінокулярним окуляром фірми Nikon. Джерело: Вікіпедія

📜 Основні характеристики світлового мікроскопа:

  • Збільшення – у скільки разів зображення об’єкта стає більшим порівняно з реальним розміром. Світловий мікроскоп має обмеження до збільшення. Окулярні лінзи зазвичай дають збільшення від 5х до 15х разів, а сухі об’єктиви до яких світло потрапляє крізь середовище повітря збільшують об’єкти від 8х до 40х разів.

🔢 Як розрахувати загальне збільшення мікроскопа?

Загальне збільшення = збільшення лінз окуляра × збільшення об’єктива

Приклад: якщо окуляр має збільшення 10x, а об’єктив – 40x, то загальне збільшення = 10 × 40 = 400x.

  • Але найбільший результат дає олієзанурна (імерсивна) світлова мікроскопія, коли об’єктив (сильні імерсивні об’єктиви дають збільшення до 90х разів) при наближенні до предметного чи покривного скла занурюється у краплю гліцеролу, кедрової олії чи інших жирів. Такий спосіб спостереження має граничні обмеження збільшення до 3000 разів. 
  • Використання об’єктивів з лінзами, що мають бути для спостереження за об’єктом занурені в олію обумовлене тим, що при проходженні через повітря, промені світла не потрапляють в об’єктив, та інформація про них втрачається – Рис. 4.

Рис 4. Принцип олієзанурної мікроскопії: промені світла (чорні лінії) при проходженні через середовище олії (крізь жовтий колір) потрапляє у об’єктив, у той час як промені, що проходять через повітря (крізь білий колір) заломлюються таким чином, що проходять повз лінзу об’єктива. Джерело: Вікіпедія

  • Роздільна здатність – найменша відстань між двома точками, за якої вони залишаються роздільними (для світлового мікроскопа це обмеження складає близько 200 нм). Приклад цієї ​​концепції представлений на Рис. 5 нижче, де точкові джерела світла від зразка виглядають як дифракційні кільця Ейрі в площині проміжного зображення мікроскопа.
Рис 5. Патерни Ейрі та межа роздільної здатності. Джерело: IMG.UA
  • Контрастність – здатність мікроскопа відображати відмінності між структурами. Для збільшення контрастності досліджуваних об’єктів науковці використовують фазово-контрастну мікроскопію (ФКМ). 
  • Цей метод оптичної мікроскопії винайшов Фріц Церніке, за що отримав Нобелівську премію 1953 року. Метод дозволяє спостерігати за живими клітинами (зокрема їх поділом), оскільки фарбування часто передбачає смерть клітин.
  • Фазові зсуви світла, яких досягають відокремленням прямого та розсіяного світла у методі видно на зображенні як зміни яскравості деталей об’єкта (Рис. 6).
Рис 6. Вигляд тваринної клітини при спостереженні у звичайний світловий мікроскоп (зліва) та фазово-контрастний мікроскоп (зправа). Джерело: Вікіпедія

3. Життєва ситуація

🔬  Ви – молоді дослідники, які готуються до своєї першої наукової експедиції. Перед вами стоїть завдання: дослідити невідомий мікроорганізм, який потенційно може стати ключем до лікування серйозного захворювання. Але для цього необхідно вміти користуватися основним інструментом біолога – світловим мікроскопом.

Світловий мікроскоп має основні компоненти:

  • Окуляр – розташований у верхній частині, через нього ми дивимось у мікроскоп (його лінзи діють збільшення 5x, 10x, 12х, 15x).
  • Об’єктиви (зазвичай на револьверній голівці, яка обертається) – забезпечують основне збільшення (сухі – 4x, 20x, 40x, імерсивні – 80x).
  • Предметний столик – платформа, де розміщують досліджуваний зразок.
  • Штатив та основа – складові корпусу мікроскопа.
  • Джерело світла – підсвічує препарат.
  • Макрогвинт – забезпечує грубе фокусування на об’єкті при відносно невеликих збільшеннях.
  • Мікрогвинт – забезпечує точне фокусування на об’єкті при більших збільшеннях.
  • Конденсор з діафрагмою – фокусує світло на зразку.

Завдання:

Розгляньте Рис. 7 – підпишіть складові частини світлового мікроскопа.

Рис 7. Світловий мікроскоп. Джерело: Bioninja

Важливі моменти техніки безпеки:

  • Піднімаючи та переставляючи мікроскоп, тримайте його однією рукою за штатив, а іншу покладіть під основу
  • Завжди починайте фокусування на препараті з об’єктива який дає найменше збільшення, а потім не міняючи положення гвинтів переключіться на інший (сильніший) та точно сфокусуйте зображення мікрогвинтом.
  • Обов’язково прибирайте предметне і покривне скло з препаратами з предметного столика після використання (не залишайте предметне скло на місці).
  • Над джерелом світла часто є регульована діафрагма – змінюйте інтенсивність світла, якщо об’єкт не видно.
  • Завжди використовуйте мікроскопи на плоских поверхнях і не залишайте їх надто близько до краю парти/столу.

Розрахунок збільшення за фактичним розміром зображення:

Щоб обчислити збільшення малюнка або зображення, необхідно використовувати рівняння (Рис.8), де

M (збільшення) = I (розмір на зображенні з лінійкою) ÷ А (фактичний розмір відповідно до шкали)

Візьміть лінійку, прикладіть до зображення , а потім до шкали на рисунку та спробуйте визначити реальний розмір представника дрібних багатоклітинних тварин – тихохода (тардиграда), зображеного на Рис. 8. З розрахунків видно що його розміри на

Рис 8. Приклад розрахунку збільшення та реальних розмірів об’єктів на прикладі тихохода. Джерело: Bioninja

Реальний розмір тихохода на зображенні: _______ мкм

Важливо:
Щоб обчислити збільшення, розмір зображення та фактичний розмір мають бути в однакових одиницях. 

Перетворення показників можна застосувати відповідно до наведеної нижче таблиці:

Цікаво знати: Уявіть метрову лінійку. Візуально розділіть її на мільярд рівних частин. Це буде 1 нанометр (10-9 метра) = 1 / 1 000 000 000 частина метра!

Рис 9. Порівняння розмірів біологічних об’єктів, де кожен наступний менше попереднього приблизно у 10 разів. Джерело: Compadre

Розгляньте біологічні об’єкти на Рис. 9. У скільки разів:

  1. Інфузорія більша за бактеріофаг Т2? Відповідь: ____________
  2. Лейкоцит людини за кишкову паличку? Відповідь: ____________

Скільки мікрометрів (мікрон) складає довжина блохи?

Відповідь: ____________ мкм


4. Попрактикуймо самостійно
Завдання 1: Мікроскопія еритроцитів

На рис. 10 зображені схема еритроцитів черепахи та схема еритроцитів людини. Розгляньте зображення:

Рис 10. Еритроцити черепахи та людини. Джерело: PhAndMathTutor

Еритроцити є клітинами крові тварин. Чого немає у клітинах тварин:

А) цитоплазми
Б) клітинної мембрани
В) клітинної стінки
Г) мітохондрій

Справжня довжина еритроцитів черепахи становить 20.5 мкм.
Обчисліть довжину збільшеного зображення еритроцитів черепахи яке ви побачите у мікроскопі при збільшені 400х:

Відповідь: __________ мкм


Ширина еритроцитів людини при збільшенні в 400 разів становить 3.08 мм. Обчисліть фактичну ширину еритроцита людини та покажіть свою відповідь у стандартній формі:

Відповідь: __________ мм


Для порівняння: клітина листка рослини має довжину 0.04 мм.
Обчисліть довжину зображення після того, як цю клітину було збільшено за допомогою мікроскопа в 500 разів:

Відповідь: __________ мм

Завдання 2: Підготовка до приготування мікропрепарату

На наступному уроці ви будете вивчати методи виготовлення мікропрепаратів, після чого виконаєте лабораторну роботу і будете досліджувати клітини за допомогою мікроскопа.

На Рис. 11 показано обладнання, яке використовується для приготування препарату клітин цибулі.

Рис 11. Обладнання для приготування мікропрепарату. Джерело: PhAndMathTutor

Детально опишіть як кожен компонент, зображений на рис 11 допоможе вам приготувати препарат:

1. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5. _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Рефлексія

✍️ Закінчіть речення:

• Найцікавішим відкриттям для мене було:

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
  • Я не очікував/очікувала, що мікроскопія може
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
  • Питання, яке мені ще хотілося б дослідити
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Оцініть свій рівень розуміння:

👍 – Все зрозуміло, можу пояснити іншому.
🤔 – Дещо зрозумів(ла), але залишились питання.
👎 – Мені було складно, хочу розібратись глибше.

💬 Обговорення:

  • Який компонент світлового мікроскопа є найважливішим, на вашу думку, і чому?
  • Як ви вважаєте, які відкриття завдяки мікроскопії можуть чекати на нас у майбутньому?
  • Чи можна було б здійснити великі біологічні відкриття без мікроскопії?

У вільний від відпочинку час

📺 Відео для натхнення:

Інтерактивні моделі:

Ділись та обговорюй важливе

Обкладинка коментарів до матеріалу